尺寸排阻色譜柱是一種基于分子尺寸差異進行分離的高效色譜柱?;诙嗫仔阅z作為固定相,利用分子在凝膠孔道中的排阻效應進行分離。在色譜柱中,大分子不能滲透到凝膠孔穴中去而被排阻,較早地流出色譜柱;中等體積的分子部分滲透;小分子則能夠完q滲透入凝膠孔道內(nèi),最后流出色譜柱。因此,樣品分子基本按其分子大小先后流出,從而達到分離的目的。
尺寸排阻色譜柱的使用技巧:
1、色譜柱的選擇與準備
選擇正確的色譜柱:根據(jù)待測樣品的性質(zhì)和分子量范圍選擇合適的色譜柱。例如,對于分子量較大的樣品,應選擇具有較大排阻極限的柱子。
色譜柱的儲存與維護:在不使用時應將色譜柱存放在適當?shù)挠袡C溶劑中,如甲醇或乙醇,以防止微生物生長和色譜柱干裂。
2、樣品的準備
樣品溶解性:確保樣品完q溶解在流動相中,避免樣品在柱上沉淀或聚集。
過濾與脫氣:樣品溶液應通過0.22微米或更小的濾膜過濾,并徹d脫氣,以防止氣泡影響色譜分析。
3、流動相的選擇與優(yōu)化
流動相組成:選擇與樣品化學性質(zhì)兼容的流動相,常用的流動相包括水、鹽溶液或有機溶劑等。
流動相流速:調(diào)整適宜的流速,通常流速的增加可以縮短分析時間,但過高的流速可能引起柱效降低。
4、系統(tǒng)的溫度控制
恒定溫度:保持色譜系統(tǒng)在恒定的溫度下運行,溫度波動可能會影響色譜峰的形狀和分離度。
5、檢測器的正確設置
選擇合適的檢測器:常用的檢測器有折射率檢測器和紫外吸收檢測器。選擇時應考慮樣品的化學性質(zhì)和檢測靈敏度需求。
檢測器靈敏度:適當調(diào)節(jié)檢測器的靈敏度,以獲得清晰可辨的色譜峰而不至于過載。
6、數(shù)據(jù)分析與處理
校準曲線的建立:使用一組已知分子量的標樣來建立校準曲線,這對于準確測定未知樣品的分子量至關(guān)重要。
數(shù)據(jù)處理軟件:利用專業(yè)的數(shù)據(jù)處理軟件進行數(shù)據(jù)收集和分析,可以有效提高數(shù)據(jù)處理的準確性和效率。